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引物合成仪溶解和保存引物的方式

发布时间:2022-01-17      点击次数:880
  引物合成仪合成步骤:
  1、脱掉附加在CPG担体上的第一个碱基5' -OH基团上的保护基 (DMTr),准备附加下一个新的碱基;
  2、活化新的碱基单体,准备与第一个碱基进行反应;
  3、第二个碱基与第一个碱基发生偶联反应;
  4、将没有反应的第一个碱基的5' -OH加帽封死 ,使其不再进一步参与反应;
  5、将核苷亚磷酸酯氧化成更稳定的核苷磷酸酯 (即将三价磷氧化成五价磷)。
  6、重复进行1~5的循环,直至合成完所需的Oligo DNA序列。
  7、合成结束后,将Oligo DNA分子从CPG上切下,再进行进一步的纯化。

  引物合成仪溶解和保存引物的方式:
  干燥后的引物质地非常疏松,开盖前最好离心一下,或管垂直向上在桌面上敲敲,将引物粉末收集到管底。根据计算出的体积加入去离子无菌水或 10mM Tris pH7.5 缓冲液,室温放置几分钟,振荡助溶,离心将溶液收集到管底。溶解引物用的水一般不要用蒸馏水,因为有些蒸馏水的 pH 值比较低( pH4-5 ) , 引物在这种条件下不稳定。
  引物合成后,经过一系列处理和纯化步骤,旋转干燥而成片状物质。引物在溶解前,室温状态下可以长期保存。溶解后的引物 -20 度可以长期保存。如果对实验的重复性要求较高,合成的 OD 数较大,建议分装,避免反复冻融。修饰荧光引物需要避光保存。


引物合成仪

 

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