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基因合成仪原理

发布时间:2022-08-09      点击次数:342
  1、sanger法:双脱氧测序的原理,DNA合成时加上一个ddNTP从而终止这条链的延伸,毛细管电泳读取分析序列。一般教材讲的都是这种方法,经典,读长800bp,但是通量小成本高。
 
  2、高通量测序方法:454也称焦磷酸测序,一个run下来约400M的数据量。将emulsionPCR产物连磁珠上,放入Pico Titer Plate,测序反应是通过释放PPi经过ATP硫酸化酶和荧光素酶作用发光,CCD捕捉拍照,反应是连续的,所以遇到连续的碱基如polyA时,454易产生误差。
 
  3、Solexa:边合成边测序,将DNA单链固定在芯片上,合成DNA簇,是一种可逆阻断的合成反应,每个循环只加上一个碱基、系统拍照一次。通过读取拍照信号分析序列,一个run约200个G数据量以上。目前能量最高,不足是读长短,现在有PE150,可以测通300bp。
 
  4、Ion torrent:特点是小巧。试剂通过集成的流体通路进入芯片中,密布于芯片上的反应孔立即成为上百万个微反应体系。这种流体体系、微体系机械设计和半导体的技术组合,使研究人员能够在2小时内获取从10Mb到1Gb以上的高精确度序列。*新一种,还没广泛应用。
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